一种高纯度总状蕨藻多酚的制备方法及其用于保鲜虾的方法

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本发明涉及一种高纯度总状蕨藻多酚的制备方法以及用于保鲜虾的方法，将总状蕨藻粉末与60～80％的乙醇按照质量体积比1∶15～30配比，微波提取15～25min，提取液在旋转蒸发仪上去除乙醇；将浓缩液中加入等体积的水，然后按照体积比1∶1～2的比例依次用乙醚、乙酸乙酯进行萃取，将乙酸乙酯萃取物在旋转蒸发仪上去除乙酸乙酯，得乙酸乙酯萃取物；将乙酸乙酯萃取物制成10mg/mL～20mg/mL的溶液，按照萃取物溶液与大孔树脂重量体积比1∶10～20的比例加到大孔树脂柱上，依次用2～3倍柱体积的水，30％乙醇，60％乙醇洗脱，收集60％乙醇洗脱液在旋转蒸发仪上去除乙醇，冷冻干燥即制得多酚保鲜剂。本发明资源丰富、工艺科学合理，制得多酚具有较高的纯度及活性，用于保鲜虾品质优，且安全，无毒。

1.一种高纯度总状蕨藻多酚的制备方法，其特征在于包括以下步骤： 1)将总状蕨藻干燥至恒重，再粉碎过筛后，得到总状蕨藻粉末； 2)将总状蕨藻粉末与60～80％(v/v)的乙醇按照质量体积比1∶15～30配比，置于微波辅助提取装置中提取15～25min，提取液在旋转蒸发仪上于40℃以下去除乙醇，得浓缩液； 3)在所得的浓缩液中加入0.8～1.2体积倍数的水，然后按照体积比1∶1～2的比例依次用乙醚、乙酸乙酯进行萃取，将乙酸乙酯萃取物在旋转蒸发仪上于40℃以下去除乙酸乙酯，得乙酸乙酯萃取物； 4)将乙酸乙酯萃取物制成10mg/mL～20mg/mL的萃取物溶液，按照萃取物溶液与大孔树脂重量体积比1∶10～20的比例加到大孔树脂柱上，依次用2～3倍柱体积的水，25～35％乙醇，55～65％乙醇洗脱，收集55～65％乙醇洗脱液在旋转蒸发仪上于40℃以下去除乙醇，浓缩液进行冷冻干燥即制得多酚保鲜剂。  2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述的步骤1)的具体过程为：将总状蕨藻于35～40℃干燥至恒重，于粉碎机中粉碎，过60～120目筛，得总状蕨藻粉末。  3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述的步骤2)中微波提取时微波功率为600～800W。  4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述的步骤2)，3)和4)中的旋转蒸发仪上去除溶剂均需避光条件下进行。  5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述的步骤4)中的大孔树脂为D101。  6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述的步骤3)依次用乙醚、乙酸乙酯进行萃取，萃取3次。  7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述的步骤4)依次用2～3倍柱体积的水，30％乙醇，60％乙醇洗脱，收集60％乙醇洗脱液在旋转蒸发仪上于40℃以下去除乙醇。  8.一种权利要求1至7任一权利要求制得的高纯度总状蕨藻多酚用于保鲜虾的方法，其特征在于：先将高纯度总状蕨藻多酚配制成0.3％～0.5％的水溶液作为保鲜液，按照质量体积比1∶1～2的比例将虾置于保鲜液中5～10分钟，取出后沥水2～3分钟，然后在4±1℃条件下贮藏。  9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于所述虾为南美白对虾、中国对虾、斑节对虾或鹰爪虾。 

技术领域

本发明属于化学工程技术领域，尤其涉及一种高纯度总状蕨藻多酚的制备方法及其 保鲜虾的方法。采用制得的高纯度总状蕨藻多酚保鲜虾，安全性高，保鲜效果好，可为 个体工商户、超市、冷库及农产品保鲜加工基地等提供服务。

背景技术

总状蕨藻(Caulerpa racemosa)属绿藻门(Chlorophyta)蕨藻科(Caulerpaceae)，是一 种大型可食性绿藻，分布区域为热带和亚热带海域的低潮间带，在我国海南、广东、广 西、台湾省等地广泛分布，但至今尚未得到有效利用。目前，国内外学者对总状蕨藻研 究主要集中在多糖及其抗肿瘤活性的研究，而对其多酚的制备工艺及其作为水产品保鲜 剂领域的应用尚未见报道。

植物多酚又称植物单宁，广泛存在于植物体内，是指来源于莽草酸途径和苯丙氨酸 代谢途径的具有多个羟基酚类植物成分的总称，其分子量在500～3000Da之间，在植 物中的含量仅次于纤维素、半纤维素和木质素，常见种类如没食子酸、儿茶素、花青素、 鞣花酸和熊果苷等。多酚类化合物具有显著的抑制脂质氧化、清除自由基和抗菌防腐等 生物活性。如被广泛关注的茶多酚、苹果多酚和葡萄多酚等均显示了良好的抗氧化活性。

目前，随着海洋活性物质的研究，海藻多酚已经引起了大家的广泛关注，已对褐藻、 红藻进行了广泛的研究，而其应用也得到了大家的关注。如中国专利CN 1063619C“海 藻多酚抗氧化剂的制备及其应用方法”即研究了从海藻中提取多酚用于防止食品腐败， 但是该方法采用乙醇冷提，提取率较低，不利于海藻资源的高效利用；中国专利CN 101194647 B“一种用海藻多酚保鲜草莓的新方法”即研究了从海藻中提取多酚用于草 莓保鲜，该方法与专利“CN 1063619 C”比较，在乙醇冷提时采用摇床动态提取，提取 率会有所增加，但是该方法提取时间长，而后续处理中仅仅采用乙醚和三氯甲烷脱除小 极性和中等极性的物质，而对于水相中的多糖、蛋白等杂质未采取方法去除，从而得到 的多酚粗提物含有大量杂质，另外制备工艺中采用三氯甲烷存在安全隐患。因此，以上 两种方法制备的海藻多酚虽然具有一定的应用价值，但是由于其工艺上存在的缺陷，多 酚的含量相对较低，含有大量的杂质和存在安全隐患，从而限制了其用途和实际应用效 果。

以总状蕨藻为原料，利用微波提取结合大孔树脂精制多酚研究处于空白阶段，对于 其在虾保鲜上的应用也尚未见报道。

发明内容

本发明所要解决的第一个技术问题是提供一种高纯度总状蕨藻多酚的制备方法，以 总状蕨藻为原料，资源丰富，制得的多酚纯度高、且具有较高的活性。

本发明所要解决的第二个技术问题是提供一种高纯度总状蕨藻多酚用于保鲜虾的 方法。

本发明解决上述第一个技术问题所采用的技术方案为：一种高纯度总状蕨藻多酚的 制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1)将总状蕨藻干燥至恒重，再粉碎过筛后，得到总状蕨藻粉末；

2)将总状蕨藻粉末与60～80％(v/v)的乙醇按照质量体积比1∶15～30配比， 置于微波辅助提取装置中提取15～25min，提取液在旋转蒸发仪上于40℃以下去除乙 醇，得浓缩液；

3)在所得的浓缩液中加入0.8～1.2(体积倍数)的水(优选等体积)，然后按照体积 比1∶1～2的比例依次用乙醚、乙酸乙酯进行萃取，将乙酸乙酯萃取物在旋转蒸发仪上 于40℃以下去除乙酸乙酯，得乙酸乙酯萃取物；

4)将乙酸乙酯萃取物制成10mg/mL～20mg/mL的溶液，按照萃取物溶液与大孔树 脂重量体积比1∶10～20的比例加到大孔树脂柱上，依次用2～3倍柱体积的水，25～35％ 乙醇，55～65％乙醇洗脱，收集55～65％乙醇洗脱液在旋转蒸发仪上于40℃以下去除乙 醇，浓缩液进行冷冻干燥即制得多酚保鲜剂。

作为改进，所述的步骤1)的具体过程为：将总状蕨藻于35～40℃干燥至恒重，于 粉碎机中粉碎，过60～120目筛，得总状蕨藻粉末。

再改进，所述的步骤2)中微波提取时微波功率为600～800W。

作为优选，所述的步骤2)，3)和4)中的旋转蒸发仪上去除溶剂均需避光条件下 进行。

所述的步骤3)依次用乙醚、乙酸乙酯进行萃取，萃取3次。

所述的步骤4)依次用2～3倍柱体积的水，30％乙醇，60％乙醇洗脱，收集60％乙 醇洗脱液在旋转蒸发仪上于40℃以下去除乙醇。

最后，所述的步骤4)中的大孔树脂为D101。

本发明解决上述第二个技术问题所采用的技术方案为：一种高纯度总状蕨藻多酚用 于保鲜虾的方法，其特征在于：先将高纯度总状蕨藻多酚配制成0.3％～0.5％的水溶液作 为保鲜液，按照质量体积比1∶1～2的比例将虾置于保鲜液中5～10分钟，取出后沥水2～3 分钟，然后在4±1℃条件下贮藏。

最后，所述虾为南美白对虾、中国对虾、斑节对虾或鹰爪虾。

与现有技术相比，本发明的优点在于：

1、本发明工艺科学合理，通过微波提取法同时融合大孔树脂精制等手段进行制备， 使总状蕨藻多酚最大程度地释放出来，提高多酚纯度，同时制得多酚具有较高的活性；

2、本发明采用的原料是总状蕨藻，资源丰富，目前尚未有效开发，对海藻产业的 可持续发展具有重要的意义；

3、本发明是以天然总状蕨藻多酚及低温来联合保鲜虾，安全，无毒，可替代化学 杀菌剂、防腐剂用于虾的防腐和保鲜，避免了化学杀菌剂引发的环境污染、食品安全、 致畸致癌等多种问题。经本发明方法保鲜的虾，在4±1℃条件下贮藏10天后，品质优 于同浓度、同条件下经茶多酚、山梨酸钾和Vc保鲜的虾。

附图说明

图1是本发明实施例不同制备物采用ZORBAX 300SB-C18HPLC分析所得的色谱 图，其中(a)为75％乙醇提取物，(b)为乙酸乙酯萃取物，(c)为大孔树脂精制时60％乙醇 洗脱物；

图2是本发明实施例中不同制备物采用红外光谱检测的谱图，其中(a)为75％乙醇 提取物，(b)为乙酸乙酯萃取物，(c)为大孔树脂精制时60％乙醇洗脱物。

具体实施方式

以下结合附图实施例对本发明作进一步详细描述。

一种高纯度总状蕨藻多酚的制备及其保鲜虾的方法，制备工艺流程如下：总状蕨藻 →烘干→粉碎、过筛→提取→液液萃取→大孔树脂精制→冷冻干燥→海藻多酚固体物→海 藻多酚溶液→选取新鲜虾→多酚溶液浸泡→沥水→低温储藏→鲜度指标分析。

具体步骤为：

1、取总状蕨藻100g于38±2℃干燥至恒重，于粉碎机中粉碎，过60目筛，得总 状蕨藻粉末。

2、将总状蕨藻粉末20g与400mL 75(v/v)％的乙醇置于微波辅助提取装置中，在 微波功率700W条件下提取时间20min，提取液在旋转蒸发仪上于38±2℃避光去除乙 醇，得浓缩液约100mL。

3、将所得的浓缩液中加入水至体积为200mL，依次用200mL的乙醚和乙酸乙酯萃 取三次，将乙酸乙酯萃取物在旋转蒸发仪上于38±2℃避光去除乙酸乙酯，得固体物0.78 g。

4、将0.78g乙酸乙酯萃取物制成15mg/mL的水溶液，加入到柱体积为1000mL的 大孔树脂柱上，依次用2000mL的水，30(v/v)％乙醇和60(v/v)％乙醇洗脱，收集60％乙 醇洗脱液在旋转蒸发仪上于38±2℃避光去除乙醇，浓缩液冷冻干燥即制得总状蕨藻多 酚230mg。

5、选取500g新鲜南美白对虾4份，分别置于0.5 L 0.3％的总状蕨藻多酚、茶多 酚、山梨酸钾和Vc保鲜液中，5分钟后取出，沥水3分钟，然后在4±1℃条件下贮藏。

6、保鲜冷藏南美白对虾于9天时，检测其酸价、过氧化值、挥发性盐基氮(TVB-N 值)和细菌总数。

所得的总状蕨藻多酚制备物中，经过Folin-Ciocalteu法检测多酚含量为130.33mg GAE/g。

保鲜南美白对虾的酸价和过氧化值的测定参照GB/T 5009.37-2003 4.1规定的方法 进行，TVB-N值的测定参照GB/T 5009.44-2003 4.1规定的方法进行，细菌总数参照GB/T 4789.2-2003规定的方法进行。

结果表明，总状蕨藻多酚制备物在抗脂肪酸酸败、抗氧化和防腐抗菌等方面优于 相同浓度下的茶多酚、山梨酸钾和Vc(表1)。

表1不同保鲜液处理对南美白酸价、过氧化值、TVB-N值和细菌总数的影响

最后，尚需注意的是，以上列举的仅是本发明的一个具体实施例。显然，本发明不 限于以上实施例，还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直 接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。

本文标签： 制备方法高纯度多酚方法总状蕨藻