一种凡纳滨对虾半定向交尾全同胞家系构建及亲本确定方法

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本发明公开了一种凡纳滨对虾半定向交尾全同胞家系构建及亲本确定方法。本发明通过1尾雌虾与多尾雄虾进行半定向交尾以确保交配成功率，再逐一检查雄虾精荚是否空缺来确定父本，采用本发明方法能够较高效地构建凡纳滨对虾全同胞家系，并得到大量的全同胞家系子代，采用本发明的方法能方便、快捷地确定全同胞家系的亲本，以便能完整地获得全同胞家系亲本的遗传及性状特征。本发明的方法将为凡纳滨对虾分子标记辅助育种提供重要的技术支持。

1.一种凡纳滨对虾半定向交尾全同胞家系构建及亲本确定方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)亲本管理：雌虾去除单侧眼柄，雄虾不去除眼柄，雌虾和雄虾分别在雌虾池和雄虾池中饲养，投喂活体饵料，保持雌虾池和雄虾池中活体饵料不间断；(2)半定向交尾：在上午挑选20尾以上精荚部位显乳白色、精子团填充饱满的雄虾放入另一池中，作为交配池；挑选1尾性腺饱满的雌虾放入交配池中与雄虾进行半定向交尾；下午检查雌虾纳精囊是否打入精荚，若打入精荚则说明已经完成交尾，将雌虾放入单独的容器中待产卵；(3)亲本确定：在容器中待产卵的雌虾即为母本；对交配池中的雄虾进行逐一检查，经强光照射后，精荚部位空缺、无乳白色精子团填充的个体即为父本；(4)受精卵处理：交尾后，定期检查雌虾是否产卵，产卵后立即移走雌虾；对受精卵进行微充气，定期搅动水体防止受精卵结块缺氧，至第二天孵出幼体为止，之后加大充气；(5)幼体培育：将确定父本和母本来源的幼体培育至仔虾，得到全同胞家系。 2.根据权利要求1所述的凡纳滨对虾半定向交尾全同胞家系构建及亲本确定方法，其特征在于，步骤(1)所述的雌虾池的水体深度为30-45cm，所述的雄虾池的水体深度为65-100cm。 3.根据权利要求1所述的凡纳滨对虾半定向交尾全同胞家系构建及亲本确定方法，其特征在于，步骤(2)所述的交配池的水体深度为65-100cm，面积为5-15m。 4.根据权利要求1所述的凡纳滨对虾半定向交尾全同胞家系构建及亲本确定方法，其特征在于，所述的强光照射为LED灯照射，所述的LED灯的功率为30-150W。 5.根据权利要求1所述的凡纳滨对虾半定向交尾全同胞家系构建及亲本确定方法，其特征在于，步骤(1)所述的活体饵料为青虫或红虫。

技术领域

本发明属于遗传育种技术领域，具体涉及一种凡纳滨对虾半定向交尾全同胞家系构建及亲本确定方法。

背景技术：

凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei,又称南美白对虾)养殖业是我国水产养殖的支柱产业之一，然而，我国优质的亲虾长期依靠进口，国内育种工作仍以传统选育为主。加强凡纳滨对虾分子遗传育种技术的研究，将有助于改善我国凡纳滨对虾产业的不利局面，促进对虾养殖产业的健康发展。

全同胞家系是分子遗传育种工作中不可缺少的实验材料，通过全同胞家系不同个体间的性状差异及与父母本遗传特征的比较，可筛选出相应的分子标记，从而为分子标记辅助育种提供依据。

凡纳滨对虾雌虾具有开放式纳精囊结构，交配后雄虾的精荚未完全进入纳精囊，容易脱落，人工授精难度较大。在生产中，需要通过几百尾成熟雄虾与较少的雌虾才能保证较高的交配率，1条成熟雌虾与1条成熟雄虾在单独水体中发生交配的概率非常低，雌虾需要被多条雄虾激烈追逐后才会与雄虾交配。目前已有的全同胞家系构建技术通过取精、卵并直接混合的方法可以直接确定父、母本，但需要杀死亲虾，且该方法受精率较低，无法得到大量后代；利用雌虾体内残留的精荚组织代表雄虾DNA，再通过亲权鉴定技术确定雄虾的方法，可以得到较多子代，但后续亲权鉴定程序步骤多，较繁琐。

发明内容：

本发明的目的是为解决凡纳滨对虾全同胞家系制备技术的不足，建立一种凡纳滨对虾半定向交尾全同胞家系构建及亲本确定方法。

本发明的凡纳滨对虾半定向交尾全同胞家系构建及亲本确定方法，包括以下步骤：

(1)亲本管理：雌虾去除单侧眼柄，雄虾不去除眼柄，雌虾和雄虾分别在雌虾池和雄虾池中饲养，投喂活体饵料，保持雌虾池和雄虾池中活体饵料不间断；

(2)半定向交尾：在上午挑选20尾以上精荚部位显乳白色、精子团填充饱满的雄虾放入另一池中，作为交配池；挑选1尾性腺饱满的雌虾放入交配池中与雄虾进行半定向交尾；下午检查雌虾纳精囊是否打入精荚，若打入精荚则说明已经完成交尾，将雌虾放入单独的容器中待产卵；

(3)亲本确定：在容器中待产卵的雌虾即为母本；对交配池中的雄虾进行逐一检查，经强光照射后，精荚部位空缺、无乳白色精子团填充的个体即为父本；

(4)受精卵处理：交尾后，定期检查雌虾是否产卵，产卵后立即移走雌虾；对受精卵进行微充气，定期搅动水体防止受精卵结块缺氧，至第二天孵出幼体为止，之后加大充气；

(5)幼体培育：将确定父本和母本来源的幼体培育至仔虾，得到全同胞家系。

步骤(1)所述的雌虾池的水体深度优选为30-45cm，所述的雄虾池的水体深度优选为65-100cm。

步骤(2)所述的交配池的水体深度优选为65-100cm，面积优选为5-15m2。

所述的强光照射优选为LED灯照射，所述的LED灯的功率优选为30-150W。

步骤(1)所述的活体饵料优选为青虫或红虫。

本发明的有益效果是：本发明结合了凡纳滨对虾的繁殖习性与特征，解决了构建全同胞家系及确定父本较困难的问题，通过1尾雌虾与多尾雄虾进行半定向交尾以确保交配成功率，再逐一检查雄虾精荚是否空缺来确定父本，采用本发明方法能够较高效地构建凡纳滨对虾全同胞家系，并得到大量的全同胞家系子代，采用本发明的方法能方便、快捷地确定全同胞家系的亲本，以便能完整地获得全同胞家系亲本的遗传及性状特征。本发明的方法将为凡纳滨对虾分子标记辅助育种提供重要的技术支撑。

附图说明：

图1是交配成功的雌虾；箭头所示为纳精囊部位；

图2是凡纳滨对虾父本精荚辨别图；A：精子团饱满的雄虾精荚，箭头所示为精荚部位；B：精子团空缺的雄虾精荚，箭头所示为精荚部位。

具体实施方式：

以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。

实施例1：

(1)亲本管理：雌虾剪去单侧眼柄，雄虾不剪眼柄，雌虾和雄虾分别在雌虾池和雄虾池中饲养，投喂活体青虫、红虫饵料，保持雌虾池和雄虾池中活体饵料不间断，雌虾池的水体深度为40cm，雄虾池的水体深度为70cm；7天后，雌虾性腺饱满，准备开始进行交配；

(2)半定向交尾：上午7:00时，挑选40尾精荚部位显乳白色、精子团填充饱满的雄虾放入另一池中，作为交配池，交配池中水体深度为70cm，面积大小为10m2；挑选1尾性腺饱满的雌虾放入交配池中与数量较多的雄虾进行半定向交尾；17:00时，若雌虾纳精囊已经打入精荚则说明已经完成交尾(图1)，将雌虾放入单独的桶中待产卵；

(3)亲本确定：在桶中待产卵的雌虾即为母本；对交配池中的雄虾进行逐一检查，经功率为50W的LED手电筒强光照射后，精荚部位空缺、无乳白色精子团填充的个体即为父本(图2)；检查应在交配后4h内完成；

(4)受精卵处理：交尾后，当天晚上21:00之后，每隔半小时检查雌虾是否产卵，产卵后立即移走雌虾，防止雌虾排泄物携带病菌并传染给受精卵；对受精卵进行微充气，每隔2小时搅动水体防止受精卵结块缺氧，至第二天孵出幼体为止，之后加大充气；

(5)幼体培育：利用活体角毛藻、螺旋藻粉、虾片、酵母等饵料，将确定父、母本来源的幼体培育至仔虾，得到全同胞家系。

实施例2：

(1)亲本管理：雌虾剪去单侧眼柄，雄虾不剪眼柄，雌虾和雄虾分别在雌虾池和雄虾池中饲养，投喂活体青虫、红虫饵料，保持雌虾池和雄虾池中活体饵料不间断，雌虾池的水体深度为30cm，雄虾池的水体深度为65cm；7天后，雌虾性腺饱满，准备开始进行交配；

(2)半定向交尾：上午6:00时，挑选20尾精荚部位显乳白色、精子团填充饱满的雄虾放入另一池中，作为交配池，交配池中水体深度为65cm，面积大小为5m2；挑选1尾性腺饱满的雌虾放入交配池中与数量较多的雄虾进行半定向交尾；16:00时，若雌虾纳精囊已经打入精荚则说明已经完成交尾，将雌虾放入单独的桶中待产卵；

(3)亲本确定：在桶中待产卵的雌虾即为母本；对交配池中的雄虾进行逐一检查，经功率为150W的LED手电筒强光照射后，精荚部位空缺、无乳白色精子团填充的个体即为父本；检查应在交配后4h内完成；

(4)受精卵处理：交尾后，当天晚上20:00之后，每隔半小时检查雌虾是否产卵，产卵后立即移走雌虾，防止雌虾排泄物携带病菌并传染给受精卵；对受精卵进行微充气，每隔2小时搅动水体防止受精卵结块缺氧，至第二天孵出幼体为止，之后加大充气；

(5)幼体培育：利用活体角毛藻、螺旋藻粉、虾片、酵母等饵料，将确定父、母本来源的幼体培育至仔虾，得到全同胞家系。

实施例3：

(1)亲本管理：雌虾剪去单侧眼柄，雄虾不剪眼柄，雌虾和雄虾分别在雌虾池和雄虾池中饲养，投喂活体青虫、红虫饵料，保持雌虾池和雄虾池中活体饵料不间断，雌虾池中水体深度为45cm，雄虾池中水体深度为100cm；7天后，雌虾性腺饱满，准备开始进行交配；

(2)半定向交尾：上午9:00时，挑选60尾精荚部位显乳白色、精子团填充饱满的雄虾放入另一池中，作为交配池，交配池中水体深度为100cm，面积大小为15m2；挑选1尾性腺饱满的雌虾放入交配池中与数量较多的雄虾进行半定向交尾；19:00时，若雌虾纳精囊已经打入精荚则说明已经完成交尾，将雌虾放入单独的桶中待产卵；

(3)亲本确定：在桶中待产卵的雌虾即为母本；对交配池中的雄虾进行逐一检查，经功率为30W的LED手电筒强光照射后，精荚部位空缺、无乳白色精子团填充的个体即为父本；检查应在交配后4h内完成；

(4)受精卵处理：交尾后，当天晚上23:00之后，每隔半小时检查雌虾是否产卵，产卵后立即移走雌虾，防止雌虾排泄物携带病菌并传染给受精卵；对受精卵进行微充气，每隔2小时搅动水体防止受精卵结块缺氧，至第二天孵出幼体为止，之后加大充气；

(5)幼体培育：利用活体角毛藻、螺旋藻粉、虾片、酵母等饵料，将确定父、母本来源的幼体培育至仔虾，得到全同胞家系。

本文标签： 亲本家系对虾同胞方法