一种椴树生根组织培养方法

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本发明提供一种椴树生根组织培养方法，按如下步骤进行：第一步，外植体选取：采取当年生的半木质化的嫩茎为材料外植体；第二步，外植体处理：采来的外植体用0.1%浓度的升汞浸泡，待用；第三步，转接：把外植体切成1.5厘米左右长，插入椴树专用基础培养基中；第四步，生根培育：选择芽体健康，放入生根培养基中培养至生根；第五步，出瓶洗苗：将幼苗轻轻夹出，用流动的水下进行清洗。本发明实现了椴树的组织培养大批量育苗，提高了育苗效率。

1.一种椴树生根组织培养方法，其特征在于：按如下步骤进行：第一步，外植体选取：在3-5月期间，采取当年生的半木质化的嫩茎为材料外植体，采取外植体时在晴天的9-15点时间段进行；第二步，外植体处理：采来的外植体材料除去不需要的叶片，用洗涤剂清洗2-3分钟后用纱布轻轻擦去茎段上的白毛，再用自来水冲洗3-4小时；洗净后拿到超净工作台上，用无菌水清洗2遍，用75%的酒精清洗30秒，用无菌水清洗2-3遍，用0.1%浓度的升汞浸泡20-25分钟，再用无菌水清洗4-5遍，待用；第三步，转接：把外植体切成1.5厘米左右长，带侧枝的茎段，在无菌环境下插入椴树专用基础培养基中，插入深度0.5厘米，一瓶3棵；将接种的培养瓶置于温度为23-27℃的洁净环境中，在光照时长为14小时/天、光照强度为2000lux-2500lux条件下培养至其萌发出侧芽；第四步，生根培育：选择芽体健康，无污染的侧芽或者顶芽，长度为3-4cm长短，放入生根培养基中，在光照强度为2000lux-2500lux，光照时长为14小时/天，培养30天-45天，培养至生根；第五步，出瓶洗苗：打开瓶口，用镊子将幼苗轻轻夹出，用流动的水下进行清洗，洗净根部附着的培养基后进行移栽。 2.如权利要求1所述的一种椴树生根组织培养方法，其特征在于：所述的椴树专用基础培养基成分按重量组分为：MS培养基为1000份、碳为0.2份、赤霉素为0.5-0.6份混合、萘乙酸为1-1.1份、细胞分裂素为0.5份、琼脂2-3份、蔗糖20-25份、肌醇0.02-0.03份，再加入NaOH调节PH值为5.8。 3.如权利要求1所述的一种椴树生根组织培养方法，其特征在于：所述的生根培养基成分按重量组分为：MS培养基为500份、吲哚丁酸为0.8-1份、琼脂2-2.2份、蔗糖12-15份、萘乙酸为0.4-0.5份、EM益生菌原液0.3-0.4份，再加入NaOH调节PH值为5.8。

技术领域

本发明属于植物组织培养领域，具体涉及一种椴树生根组织培养方法。

背景技术

椴树为乔木，高20米，树皮灰色，直裂；小枝近秃净，顶芽无毛或有微毛；叶卵圆形，长7-14厘米，宽5.5-9厘米，先端短尖或渐尖，基部单侧心形或斜截形，上面无毛，下面初时有星状茸毛，以后变秃净，在脉腋有毛丛，干后灰色或褐绿色，侧脉6-7对，边缘上半部有疏而小的齿突；叶柄长3-5厘米，近秃净；聚伞花序长8-13厘米，无毛；花柄长7-9毫米；苞片狭窄倒披针形，长10-16厘米，宽1.5-2.5厘米，无柄，先端钝，基部圆形或楔形，上面通常无毛，下面有星状柔毛，下半部5-7厘米与花序柄合生；萼片长圆状披针形，长5毫米，被茸毛，内面有长茸毛；花瓣长7-8毫米；退化雄蕊长6-7毫米；雄蕊长5毫米；子房有毛，花柱长4-5毫米；果实球形，宽8-10毫米，无棱，有小突起，被星状茸毛。椴树现有的育苗一般采用种子种植，此种方式效率低；组织培养为一种常见的提高产量的方式；而椴树由于结构特征，现有的组织培养方式使得其在组织培养过程中组织不易愈合，容易出现黑化；且不易生根，出苗成功率低。

发明内容

本发明的目的是解决上述不足，提供一种椴树生根组织培养方法。

为实现上述目的，本发明的技术解决方案是：一种椴树生根组织培养方法，其特征在于按如下步骤进行：

第一步，外植体选取：在3-5月期间，采取当年生的半木质化的嫩茎为材料外植体，采取外植体时在晴天的9-15点时间段进行；

第二步，外植体处理：采来的外植体材料除去不需要的叶片，用洗涤剂清洗2-3分钟后用纱布轻轻擦去茎段上的白毛，再用自来水冲洗3-4小时；洗净后拿到超净工作台上，用无菌水清洗2遍，用75%的酒精清洗30秒，用无菌水清洗2-3遍，用0.1%浓度的升汞浸泡20-25分钟，再用无菌水清洗4-5遍，待用；

第三步，转接：把外植体切成1.5厘米左右长，带侧枝的茎段，在无菌环境下插入椴树专用基础培养基中，插入深度0.5厘米，一瓶3棵；将接种的培养瓶置于温度为23-27℃的洁净环境中，在光照时长为14小时/天、光照强度为2000lux-2500lux条件下培养至其萌发出侧芽；

第四步，生根培育：选择芽体健康，无污染的侧芽或者顶芽，长度为3-4cm长短，放入生根培养基中，在光照强度为2000lux-2500lux，光照时长为14小时/天，培养30天-45天，培养至生根；

第五步，出瓶洗苗：打开瓶口，用镊子将幼苗轻轻夹出，用流动的水下进行清洗，洗净根部附着的培养基后进行移栽。

所述的椴树专用基础培养基成分按重量组分为：MS培养基为1000份、碳为0.2份、赤霉素为0.5-0.6份混合、萘乙酸为1-1.1份、细胞分裂素为0.5份、琼脂2-3份、蔗糖20-25份、肌醇0.02-0.03份，再加入NaOH调节PH值为5.8。

所述的生根培养基成分按重量组分为：MS培养基为500份、吲哚丁酸为0.8-1份、琼脂2-2.2份、蔗糖12-15份、萘乙酸为0.4-0.5份、EM益生菌原液0.3-0.4份，再加入NaOH调节PH值为5.8。

本发明的提供的一种椴树生根组织培养方法，经过长期实验及实际工作组培经验，通过培养基各组分和各步骤的配合作用，实现了椴树的组织培养大批量育苗，提高了育苗效率，在培养基中添加了适量的碳，能够防止愈伤组织褐化甚至黑化，克服了愈伤组织不能直接形成幼芽缺陷；提高了椴树茎段组织培养幼苗生长态势，提高了生根率，生根率现已达到60%以上，在培养基中添加了益生菌，促进了根系发育，提高出苗成功率。

具体实施方式

本发明的提供的一种椴树生根组织培养方法，具体按如下实施例进行。

实施例1：

第一步，外植体选取：在3-5月期间，采取当年生的半木质化的嫩茎为材料外植体，采取外植体时在晴天的9-15点时间段进行；

第二步，外植体处理：采来的外植体材料除去不需要的叶片，用洗涤剂清洗2-3分钟后用纱布轻轻擦去茎段上的白毛，再用自来水冲洗3-4小时；洗净后拿到超净工作台上，用无菌水清洗2遍，用75%的酒精清洗30秒，用无菌水清洗2-3遍，用0.1%浓度的升汞浸泡20-25分钟，再用无菌水清洗4-5遍，待用；

第三步，转接：把外植体切成1.5厘米左右长，带侧枝的茎段，在无菌环境下插入椴树专用基础培养基中，插入深度0.5厘米，一瓶3棵；将接种的培养瓶置于温度为23-27℃的洁净环境中，在光照时长为14小时/天、光照强度为2000lux-2500lux条件下培养至其萌发出侧芽；所述的椴树专用基础培养基成分按重量组分为：MS培养基为1000份、碳为0.2份、赤霉素为0.6份混合、萘乙酸为1.1份、细胞分裂素为0.5份、琼脂3份、蔗糖25份、肌醇0.03份，再加入NaOH调节PH值为5.8；

第四步，生根培育：选择芽体健康，无污染的侧芽或者顶芽，长度为3-4cm长短，放入生根培养基中，在光照强度为2000lux-2500lux，光照时长为14小时/天，培养30天-45天，培养至生根；所述的生根培养基成分按重量组分为：MS培养基为500份、吲哚丁酸为0.8份、琼脂2份、蔗糖12份、萘乙酸为0.4份、EM益生菌原液0.3份，再加入NaOH调节PH值为5.8；

第五步，出瓶洗苗：打开瓶口，用镊子将幼苗轻轻夹出，用流动的水下进行清洗，洗净根部附着的培养基后进行移栽。

实施例2：

第一步，外植体选取：在3-5月期间，采取当年生的半木质化的嫩茎为材料外植体，采取外植体时在晴天的9-15点时间段进行；

第二步，外植体处理：采来的外植体材料除去不需要的叶片，用洗涤剂清洗2-3分钟后用纱布轻轻擦去茎段上的白毛，再用自来水冲洗3-4小时；洗净后拿到超净工作台上，用无菌水清洗2遍，用75%的酒精清洗30秒，用无菌水清洗2-3遍，用0.1%浓度的升汞浸泡20-25分钟，再用无菌水清洗4-5遍，待用；

第三步，转接：把外植体切成1.5厘米左右长，带侧枝的茎段，在无菌环境下插入椴树专用基础培养基中，插入深度0.5厘米，一瓶3棵；将接种的培养瓶置于温度为23-27℃的洁净环境中，在光照时长为14小时/天、光照强度为2000lux-2500lux条件下培养至其萌发出侧芽；所述的椴树专用基础培养基成分按重量组分为：MS培养基为1000份、碳为0.2份、赤霉素为0.5份混合、萘乙酸为1份、细胞分裂素为0.5份、琼脂2份、蔗糖20份、肌醇0.02份，再加入NaOH调节PH值为5.8；

第四步，生根培育：选择芽体健康，无污染的侧芽或者顶芽，长度为3-4cm长短，放入生根培养基中，在光照强度为2000lux-2500lux，光照时长为14小时/天，培养30天-45天，培养至生根；所述的生根培养基成分按重量组分为：MS培养基为500份、吲哚丁酸为1份、琼脂2.2份、蔗糖15份、萘乙酸为0.5份、EM益生菌原液0.4份，再加入NaOH调节PH值为5.8；

第五步，出瓶洗苗：打开瓶口，用镊子将幼苗轻轻夹出，用流动的水下进行清洗，洗净根部附着的培养基后进行移栽。

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