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本发明公开了一种西府海棠的组织培养方法，包括如下步骤：选择一生长良好的优质西府海棠做材料，并取得无菌的0.5cm见方的叶片切块、1cm左右的叶柄和茎段长条，将其均接种于培养基a上；5周左右时会形成明显的丛生芽，将该丛生芽切成小块，并分别接种于培养基b和c上进行增殖；4周之后，当切块进入大量增殖阶段时，将分化的芽转接到培养基d上进行培养；再过约3周后将高约3cm、生长健硕的无根状苗，接种至培养基e上；再过3周后，苗基部长出白色的根须，此时，试管苗放置于通风处三天，再取出小苗，将其移栽至混合基质中继续栽培即可。采用本发明能够快速培育出大量的而又优质的西府海棠幼苗，且成活率在95%以上。
1.一种西府海棠的组织培养方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤A：准备以下5种培养基：培养基a：诱导愈伤组织培养基MS+BA3-5mg/L；培养基b：丛生芽增殖培养基MS+BA1.0+NAA0.1mg/L；培养基c：丛生芽增殖培养基MS+BA0.5+NAA0.1mg/L；培养基d：壮苗培养基1/2MSmg/L；培养基e：诱导生根培养基1/2MS+NAA0.2mg/L；步骤B：选择一4年生长势良好的优质西府海棠做材料，并在无菌环境下取得无菌的0.5cm见方的叶片切块、1cm左右的叶柄和茎段长条，并将其均接种于培养基a上；步骤C：接种、培养约5周左右时会形成明显的丛生芽，将该丛生芽切成小块，并分别接种于培养基b和c上进行增殖；步骤D：再过约4周之后，当切块进入大量增殖阶段时，将分化的芽转接到培养基d上进行培养；步骤E：再过约3周后出现生长健壮、个体粗壮的无根苗，此时，将高约3cm、生长健硕的无根状苗，接种至培养基e上；步骤F：再过3周后，苗基部长出白色的的根须，此时，试管苗放置于通风处三天，再取出小苗，将其移栽至混合基质中继续栽培即可。 2.如权利要求1所述的一种西府海棠的组织培养方法，其特征在于，所述5种培养基中均还需加入3.0%蔗糖、0.8%琼脂，在PH值为5.8的环境下。 3.如权利要求1所述的一种西府海棠的组织培养方法，其特征在于，所述5种培养基的培养温度为22℃-26℃之间。 4.如权利要求1所述的一种西府海棠的组织培养方法，其特征在于，所述幼苗的光照时间为10h/d，光照强度为80Olx。 5.如权利要求1所述的一种西府海棠的组织培养方法，其特征在于，所述步骤B中无菌材料的取得步骤为：先将西府海棠的叶片、叶柄和茎段用适量洗衣服兑水洗涤，然后用自来水反复冲洗，在无菌环境中用75%的酒精药棉擦拭干净，放于饱和漂白粉溶液内10分钟，再置于0.1%升汞溶液中消毒2分钟，用无菌水冲洗5-6次，用消毒滤纸吸干表面水分即可。 6.如权利要求1所述的一种西府海棠的组织培养方法，其特征在于，所述步骤F中取出小苗后，应洗去小苗根部残留的培养基，并且种植前将根部应在0.2%NaSO溶液中滞留片刻。 7.如权利要求1所述的一种西府海棠的组织培养方法，其特征在于，所述混合基质由高压灭菌消毒过的蛭石、细沙和园土，按1:1:1混合而成。
技术领域
本发明涉及海棠培养的技术领域，特别涉及一种西府海棠的组织培养方法。
背景技术
西府海棠，别名又称为小果海棠，为蔷薇科苹果属的植物，因晋朝时生长在西府而得名。树枝直立性较强，高达2.5-5米，小枝细弱圆柱形，嫩时被短柔毛，老时脱落，呈紫红色或暗褐色，具有稀疏的皮孔。其花呈伞形总状花序，有4-7朵集生于小枝顶端，花梗长2-3厘米。其花期在4-5月，果期在8-9月。
西府海棠在海棠花类中树态峭立，似亭亭少女。花红，叶绿，果美，不论孤植、列植、丛植均极美观。具备非常高的观赏价值，一般多栽培于庭园供绿化使用。
此外，西府海棠常用的繁殖方法通常以嫁接和分株繁殖为主，亦可采用播种、压条及根插等方法繁殖，然而，这两种传统的繁殖方式生长出的种苗质量却不高，而且繁殖系数较低，从而导致市场供不应求。
发明内容
本发明的目的是：提供一种西府海棠的组织培养方法，其能够快速获得大量优质的西府海棠种苗，从而实现优质海棠种苗的量产，满足市场的需求。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：
一种西府海棠的组织培养方法，包括如下步骤：
步骤A：准备以下5种培养基：
培养基a：诱导愈伤组织培养基MS+BA3-5mg/L；
培养基b：丛生芽增殖培养基MS+BA1.0+NAA0.1mg/L；
培养基c：丛生芽增殖培养基MS+BA0.5+NAA0.1mg/L；
培养基d：壮苗培养基1/2MSmg/L；
培养基e：诱导生根培养基1/2MS+NAA0.2mg/L；
步骤B：选择一4年生长势良好的优质西府海棠做材料，并在无菌环境下取得无菌的0.5cm见方的叶片切块、1cm左右的叶柄和茎段长条，并将其均接种于培养基a上；
步骤C：接种、培养约5周左右时会形成明显的丛生芽，将该丛生芽切成小块，并分别接种于培养基b和c上进行增殖；
步骤D：再过约4周之后，当切块进入大量增殖阶段时，将分化的芽转接到培养基d上进行培养；
步骤E：再过约3周后出现生长健壮、个体粗壮的无根苗，此时，将高约3cm、生长健硕的无根状苗，接种至培养基e上；
步骤F：再过3周后，苗基部长出白色的的根须，此时，试管苗放置于通风处三天，再取出小苗，将其移栽至混合基质中继续栽培即可。
进一步，所述5种培养基中均还需加入3.0%蔗糖、0.8%琼脂，在PH值为5.8的环境下。
进一步，所述5种培养基的培养温度为22℃-26℃之间。
进一步，所述幼苗的光照时间为10h/d，光照强度为80Olx。
进一步，所述步骤B中无菌材料的取得步骤为：先将西府海棠的叶片、叶柄和茎段用适量洗衣服兑水洗涤，然后用自来水反复冲洗，在无菌环境中用75%的酒精药棉擦拭干净，放于饱和漂白粉溶液内10分钟，再置于0.1%升汞溶液中消毒2分钟，用无菌水冲洗5-6次，用消毒滤纸吸干表面水分即可。
进一步，所述步骤F中取出小苗后，应洗去小苗根部残留的培养基，并且种植前将根部应在0.2%Na2SO4溶液中滞留片刻。
进一步，所述混合基质由高压灭菌消毒过的蛭石、细沙和园土，按1:1:1混合而成。
本发明的有益效果是：采用本发明能够快速培育出大量的而又优质的西府海棠幼苗，且成活率在95%以上。
具体实施方式
本发明在实践操作中具体的步骤如下：
首先进行的是准备工作,择选优质的西府海棠的叶片、叶柄和茎段，以备使用。
准备以MS为基本培养基的5种培养基：
培养基a：诱导愈伤组织培养基MS+BA3-5mg/L；
培养基b：丛生芽增殖培养基MS+BA1.0+NAA0.1mg/L；
培养基c：丛生芽增殖培养基MS+BA0.5+NAA0.1mg/L；
培养基d：壮苗培养基1/2MSmg/L；
培养基e：诱导生根培养基1/2MS+NAA0.2mg/L；
其中，在上述培养基中均还需加入3.0%蔗糖、0.8%琼脂，在PH值为5.8的环境下；培养温度为22℃-26℃之间，培养中的光照时间为10h/d，光照强度为80Olx。
无菌材料的获取：将西府海棠的叶片、叶柄和茎段用适量洗衣粉对水洗涤，然后用自来水反复冲洗，在无菌环境中用75%的酒精药棉擦拭干净，放于饱和漂白粉溶液内10分钟，再置于0.1%升汞溶液中消毒2分钟，用无菌水冲洗5-6次，用消毒滤纸吸干表面水分，并在无菌环境下将其切为0.5cm见方的叶片切块、1cm左右的叶柄和茎段长条，并将其均接种于培养基a上。
丛芽的诱导和增殖期：接种、培养约5周左右时会形成明显的丛生芽，将该丛生芽切成小块，并分别接种于培养基b和c上进行增殖；此时，小芽丛上会分化出很多幼芽，叶、叶柄和茎段在两个培养基上的增殖速度基本相同，约4周左右，继代1次，增殖系数可达6-9。
壮苗期：再过约4周之后，当切块进入大量增殖阶段时，将分化的芽转接到培养基d上进行培养；3周后可发现生长健壮、个体粗壮的无根苗。这将为以后生根、移苗出瓶、适应外界环境，增强抗病能力等提供良好的条件。
根的诱导期：将高约3cm、生长健硕的无根状苗，接种至培养基e上；2周后苗基部长出辐射状的白色小根，每株生根5-7条。
试管苗的移栽：3周后，苗基部长出白色的的根须，此时，试管苗放置于通风处三天，再取出小苗，取出小苗后，应洗去小苗根部残留的培养基，并且种植前将根部应在0.2%Na2SO4溶液中滞留片刻。将其移栽至由高压灭菌消毒过的蛭石、细沙和园土，按1:1:1混合而成的混合基质中继续栽培即可。
之后，还需在地上面喷洒0.1%多菌灵溶液，用薄膜覆盖，每天喷水2次，1周后揭膜，成活率将达到95%以上。
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