一种对虾饲料添加剂及其应用

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本发明公开了一种对虾饲料添加剂，所述添加剂为番石榴叶，所述番石榴叶添加在对虾基础饲料中，制成的含有番石榴叶的对虾饲料具有促进斑节对虾生长和增强对虾免疫功能。本发明还公开了上述对虾饲料添加剂在制备具有促进斑节对虾生长和增强对虾免疫功能方面的饲料方面的应用。

1.一种对虾饲料添加剂，其特征是：所述添加剂为番石榴叶，所述番石榴叶添加在对虾基础饲料中，制成的含有番石榴叶的对虾饲料具有促进斑节对虾生长和增强对虾免疫调节功能。 2.根据权利要求1所述的对虾饲料添加剂，其特征是：所述番石榴叶的添加量占对虾基础饲料总质量的0.20～1.0‰。 3.根据权利要求2所述的对虾饲料添加剂，其特征是：所述番石榴叶的添加量占对虾基础饲料总质量的0.25‰。 4.根据权利要求3所述的对虾饲料添加剂，其特征是：所述对虾饲料的投喂量占对虾总质量的5～8％。 5.根据权利要求1-4任一项所述的对虾饲料添加剂，其特征是：所述番石榴叶经粉碎过60目筛后使用。 6.权利要求1-4任一项所述的对虾饲料添加剂在制备具有促进斑节对虾生长和增强斑节对虾免疫功能方面的饲料方面的应用。

技术领域

本发明属于对虾饲料技术领域，具体为一种对虾饲料添加剂及其应用。

背景技术

斑节对虾作为当前世界上三大养殖虾类中养殖面积和产量最大的对虾养殖品种，具 有生长快，适应性强，食性杂，产量高和经济效益显著等特点，近年来在我国南方沿海 的育苗和养殖也在不断扩大。但从传统粗放型向现代集约化养殖的转变过程中，病害已 经成为了制约水产养殖业健康发展的关键因素。大量抗生素、有机农药以及防病抗病药 物的长期使用已严重污染了养殖水体，而且其残留还会影响水产品的品质，降低水产品 的营养价值，甚至危害人类的健康，严重制约水产养殖业的可持续发展。因此，具有免 疫调节作用的中草药引起了国内外的重视。

中草药具有天然、高效、毒副作用少、抗药性不显著、资源丰富以及性能多样等优 点，既能提高水产动物性能和饲料利用率，又能防治病害，能有效替代抗生素、有机农 药以及防病抗病药物，在水产养殖中越来越受到人们的青睐。目前关于番石榴叶提高对 虾的生长性能和调节对虾的非特异性免疫方面的研究还未发现。

发明内容

本发明的目的在于提供一种对虾饲料添加剂，该对虾饲料添加剂可加入在对虾基础 饲料中，制成的对虾饲料具有促进斑节对虾生长和增强对虾免疫调节功能的作用。

本发明的目的还在于提供上述对虾饲料添加剂在制备具有促进斑节对虾生长和增强 斑节对虾免疫功能方面的饲料方面的应用。

本发明的第一个目的是通过如下技术方案来实现的：一种对虾饲料添加剂，所述添 加剂为番石榴叶，所述番石榴叶添加在对虾基础饲料中，制成的含有番石榴叶的对虾饲 料具有促进斑节对虾生长和增强斑节对虾免疫功能的作用。

番石榴叶中含有丰富的黄酮类化合物、酚类化合物、多糖、无机元素、挥发油、皂 苷及齐墩果酸与熊果酸等多种功能成分，其所含的槲皮素能通过拮抗钙离子，使病毒因 缺少钙离子的辅助而不能进入细胞内，2α-羟基熊果酸能通过刺激FN-γ分泌，来增强 对虾机体的免疫功能。

实际上，本发明通过后续的试验获知，在对虾基础饲料中添加不同含量的番石榴叶 时，均可以促进对虾的生长，并对对虾具有免疫调节功能。

作为本发明的一种优选方案，本发明所述番石榴叶的添加量占对虾基础饲料总质量 的0.20～1.0‰。

作为本发明的一种较佳的方案，本发明所述番石榴叶的添加量占对虾基础饲料总质 量的0.25‰。

本发明述对虾基础饲料的组成和质量份优选配比如下：

实际上，这里仅是列举其中的一种对虾基础饲料的配比方案，采用其它配比的对虾 基础饲料的方案也是可以的。

作为本发明的一种更好的技术方案，本发明所述对虾饲料的投喂量占对虾总质量的 5～8％。

本发明所述番石榴叶须经粉碎过60目筛后使用。

本发明的第二个目的是通过如下技术方案来实现的：上述对虾饲料添加剂在制备具 有促进斑节对虾生长和增强斑节免疫功能方面的饲料方面的应用。

本发明的优点是：番石榴叶来源广泛，毒副作用小，抗药性不显著，化学成分结构 多样，既能提高对虾的生长性能，又能通过增强免疫来防治病害，能有效替代抗生素、 有机农药以及防病抗病药物，能有效降低生产成本，提高收益。

附图说明

图1是实施例1-5和对比例中含有番石榴叶的对虾饲料对斑节对虾血清酚氧化酶活 力的影响；

图2是实施例1-5和对比例中含有番石榴叶的对虾饲料对斑节对虾血清酸性磷酸酶 活力的影响；

图3是实施例1-5和对比例中含有番石榴叶的对虾饲料对斑节对虾血清碱性磷酸酶 活力的影响；

图4是实施例1-5和对比例中番石榴叶的对虾饲料对斑节对虾血清超氧化物歧化酶 (SOD)活力的影响。

具体实施方式

实施例1

本实施例提供的对虾饲料添加剂，该添加剂为番石榴叶，该番石榴叶添加在对虾基 础饲料中，番石榴叶的添加量占对虾基础饲料总质量的0.25‰。

对虾基础饲料的组成和质量份配比如下（下同）：

实施例2

本实施例提供的对虾饲料添加剂，该添加剂为番石榴叶，该番石榴叶添加在对虾基 础饲料中，番石榴叶的添加量占对虾基础饲料总质量的0.5‰。

对虾基础饲料的组成和质量份配比同上。

实施例3

本实施例提供的对虾饲料添加剂，该添加剂为番石榴叶，该番石榴叶添加在对虾基 础饲料中，番石榴叶的添加量占对虾基础饲料总质量的1‰。

对虾基础饲料的组成和质量份配比同上。

实施例4

本实施例提供的对虾饲料添加剂，该添加剂为番石榴叶，该番石榴叶添加在对虾基 础饲料中，番石榴叶的添加量占对虾基础饲料总质量的2‰。

对虾基础饲料的组成和质量份配比同上。

实施例5

本实施例提供的对虾饲料添加剂，该添加剂为番石榴叶，该番石榴叶添加在对虾基 础饲料中，番石榴叶的添加量占对虾基础饲料总质量的4‰。

对虾基础饲料的组成和质量份配比同上。

对比例

本实施例提供的对虾饲料添加剂，该添加剂为番石榴叶，该番石榴叶添加在对虾基 础饲料中，番石榴叶的添加量占对虾基础饲料总质量的0‰。

对虾基础饲料的组成和质量份配比同上。

以下对上述对虾饲料具有促进斑节对虾生长和增强对虾免疫功能进行试验：

1、试验材料和方法

1.1对虾选择

试验用虾为南海水产研究所深圳基地养殖场饲养的斑节对虾，体重为1.576g± 0.011g。

1.2试验验饲料的制备

试验饲料中番石榴叶的添加量分别为0.25‰（质量百分含量，下同，实施例1）、0.5‰ （实施例2）、1‰（实施例3）、2‰（实施例4）、4‰（实施例5）、0‰（对比例），各 组饲料中的番石榴叶添加量的差额以等量的高精面粉代替。基础饲料组成见表1（陈义 芳等，不同规格南美白对虾对蛋白质需要量的研究。广东农业科学，2011，13：118-121。）。 饲料原料粉混匀后加入40%的自来水搅拌均匀，制成粒径为1.0mm和2.0mm的颗粒， 晒干后置于-20℃冰箱中保存备用。

表1对虾基础饲料营养成分(%)

1.3试验对虾的养殖条件

斑节对虾在水产研究实验室内暂养，养殖水经沉淀后过滤，保持连续24h充气，每 天换水量约为1/3，温度保持在28～30℃，盐度为32‰～33‰。暂养至对虾状态稳定，适 应环境后挑选体色健康大小均匀的斑节对虾进行试验。试验对虾分6组，每组三个平行， 分别对应6组饲料，置于体积为0.5m3的圆形塑料桶中，塑料桶用尼龙网盖住，饲养8 周后称重。

1.4饲养管理

试验用斑节对虾于每天8:00、17:00、22:00进行投料，投料量为对虾质量的5%～8%， 并根据摄食情况适当调整投喂量，养殖过程全程不进行水体消毒，不投喂任何药物。

1.5对虾血清获取

实验结束后取血。取血时用1mL的一次性注射器自对虾头胸甲后插入心脏抽取血 液，每桶取10尾虾的血液合并置入无菌离心管中，4℃冰箱过夜，待血液凝固后， 4000r/min离心10min即得血清，置于-80℃冰箱保存备用。

1.6对虾生长测定

试验开始时，选取大小均匀的对虾25尾称初重，置于塑料桶中养殖，共准备18桶， 各桶中对虾总质量相差小于5%，分为6组，每组3桶，分别投喂6组饲料，饲养试验 结束后，每组对虾分别称取体重，计算相对增重率。计算公式如下：

相对增重率(%)＝[(试验末体重-试验初体重)/试验初体重]×100%。

1.7非特异性免疫因子的测定

L-dopa购自于Sigma公司，酚氧化酶(PO)活力按改进了的Ashida方法测定。将 3mL0.1mol/L、pH＝6.0的磷酸缓冲液与0.1mL0.01mol/L的L-dopa及0.1mL待测血清 于室温下混匀，每次间隔2min读取在490nm波长下的光吸收值。以A490对反应时间 作图，以试验条件下A490每1min增加0.001定义为1个酶活力单位。

酸性磷酸酶（ACP）、碱性磷酸酶（AKP）超氧化物歧化酶（SOD）活力的测定采 用试剂盒的测定方法,试剂盒购于南京建成生物工程研究所。ACP和AKP定义为100mL 血清在37℃与基质作用15min产生1mg酚为1个金氏单位。SOD酶活力单位定义为1 ml反应液中SOD抑制率达50%时所对应的SOD量为1个活力单位（U）。

2、试验结果与分析

2.1番石榴叶对斑节对虾生长的影响

投喂含有不同浓度番石榴叶的饲料后，斑节对虾的相对增重率均有明显提高。试验 结束后对照组的相对增长率为212.95%～216.20%；而投喂添加番石榴叶的饲料后，斑节 对虾的增重率均显著高于对照组（P＜0.05）。

表2实施例1-5和对比例中斑节对虾的相对增重率

2.2番石榴叶对斑节对虾血清酚氧化酶（PO）活力的影响

投喂添加不同浓度番石榴叶的饲料后，斑节对虾的血清PO活力均有明显提高。添 加0.25‰、0.5‰、1‰、2‰、4‰组的PO活力分别达到7.5、5.9、5.4、3.7、3.6均高于 对照组的3.4，添加0.25‰、0.5‰、1‰组均与对照组之间差异显著（P<0.05）。添加2‰、 4‰组与对照组差异不显著（P＞0.05），且添加0.25‰组的PO活力最高，随着番石榴叶 添加量的增加，PO活力降低，但仍高于对照组（具体如图1所示）。

2.3番石榴叶对斑节对虾血清酸性磷酸酶（ACP）活力的影响

番石榴叶对斑节对虾血清酸性磷酸酶（ACP）活力的影响如图2所示，由图2可见， 投喂添加不同浓度番石榴叶的饲料后，四个处理组的ACP活力均高于对照组，且0.5‰、 1‰、2‰、4‰组与对照组差异显著(P<0.05)，0.25‰组与对照组差异不显著(P>0.05)， ACP活力随着番石榴叶的添加量的增加而升高，当添加量达到1‰时，ACP活力达到最 高，再继续增大番石榴叶的添加浓度，ACP活力反而降低。

2.4番石榴叶对斑节对虾血清碱性磷酸酶（AKP）活力的影响

番石榴叶对斑节对虾血清碱性磷酸酶（AKP）活力的影响如图3所示，由图3可见， 投喂添加不同浓度番石榴叶的饲料后，四个处理组的AKP活力均高于对照组，且1‰组 与对照组差异显著(P<0.05)，0.25‰、0.5‰、2‰、4‰组与对照组差异不显著(P＞0.05)， AKP活力随着番石榴叶的添加量的增加而升高，当添加量达到1‰时，AKP活力达到最 高，之后随着番石榴叶的添加浓度的增加而降低。

2.5番石榴叶对斑节对虾血清超氧化物歧化酶（SOD）活力的影响

番石榴叶对斑节对虾血清超氧化物歧化酶（SOD）活力的影响如图4中所示，由图 4可见，在饲料中添加0.25‰、0.5‰番石榴叶的这两组对虾血清SOD活力均高于对照 组，在0.25‰时达到最高，并随着番石榴叶添加量的增加而降低，在2‰和4‰时低于 对照组，但试验组的血清SOD活力与对照组差异均不显著(P＞0.05)。

3、结论

实验结果表明：在饲料中添加0.25‰、0.5‰、1‰、2‰、4‰的番石榴叶，均能促 进斑节对虾的生长，且与对照组差异显著（P＜0.05）。添加番石榴叶的浓度在0.25‰时 相对增重率增加量最高，随着添加浓度的增高，相对增重率增加降低。

酚氧化酶原激活系统是一种与脊椎动物补体系统类似的酶级联系统，此系统位于血 细胞内，酚氧化酶原以非活化的状态存在于血细胞颗粒中，可被许多微生物中具有免疫 活性的物质激活而产生连锁反应，产生酚氧化酶（PO），并释放出黑色素及一些高活性 的中间产物，刺激血细胞来进行吞噬，结节形成，包囊和移动等，减缓病原在体内的扩 散和感染。很多研究表明，酚氧化酶（PO）活力高的对虾对病原的抵抗能力强。如图1 所示，在饲料中添加0.25‰、0.5‰、1‰番石榴叶的这三组对虾的PO活力均显著高于 对照组（P<0.05），0.25‰组PO活力最高，而其余两组与对照组差异不显著(P>0.05)。

磷酸酶是一种能催化各种含磷化合物水解的酶类，广泛存在于各种动物体内，是动 物体内重要的解毒体系，包括酸性磷酸酶（ACP）和碱性磷酸酶（AKP）。ACP是巨噬 细胞溶酶体的标志酶，有研究结果表明，在甲壳动物血细胞进行吞噬作用和包囊作用的 免疫反应中，会伴有ACP的释放。而AKP是生物体内的一种重要的代谢调控酶，不仅 可以直接参与磷酸集团的转移，还可参与机体蛋白质的合成。从图2中可以看出在饲料 中添加0.25‰、0.5‰、1‰、2‰、4‰的番石榴叶均能提高对虾血清ACP活力，除0.25 ‰组与对照组差异不显著(P>0.05)外，其余各组都显著高于对照组(P<0.05)，其中，1‰ 组最高。从图3可以看出添加1‰番石榴叶组对虾血清AKP活力显著高于对照组 (P＜0.05)，而其余四组与对照组差异不显著(P＞0.05)。

超氧化物歧化酶（SOD）是体内的一种重要的氧自由基清除剂，能够平衡体内的氧 自由基，从而避免体内超氧阴离子自由基浓度过高引起的不良反应。从图4中可以看出， 在饲料中添加0.25‰、0.5‰番石榴叶的这两组对虾血清SOD活力均高于对照组，在 0.25‰时达到最高，并随着番石榴叶添加量的增加而降低，在2‰和4‰时低于对照组， 但与对照组差异均不显著(P>0.05)。

综上所述，番石榴叶可以促进斑节对虾的生长，且添加浓度在0.25‰相对增重率最 高；并且番石榴叶具有一定的免疫调节功能，能有效的提高斑节对虾血清PO、ACP、 AKP、SOD的活力。无论对进斑节对虾生长的促进，还是对免疫的增强作用，都与添加 浓度相关，超过一定浓度不能继续增加作用效果；综合考虑，添加量在0.25‰～1‰比较 合适。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限 制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简 化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围。

本文标签： 对虾及其应用饲料添加剂